业务咨询
Big Molecule PK Profiling
生物分析能力
- 检测物：Fc，Fab，ADC，TAG，VHH，细胞因子
- AH50/CH50 溶血分析
- 物种：小鼠，猴，大鼠，人
- 抗双链DNA分析
- 使用WinNonlin进行数据分析、解读与解决问题
- 受体占位分析：小鼠，猴，大鼠
- MDCK-hFcRn体外PK跨膜分析
- 标准化的ADA & Nab 检测
- 体外PK应用范围：IgG，Fc融合蛋白，Fc 突变，ADC以及YTE突变抗体…
- 多元化的检测平台：ELISA，MSD，FACS，FRET，qPCR，HTRF
-
Trastuzumab PK 分析策略
包被抗体 检测抗体 检测物 检测限 检测平台 鼠抗人IgG
(from AB MAX)HRP-羊抗人IgG
(from Jackson)Trastuzumab
(In house)320-40960ng/ml 384Plus
-SpectraMax -
Trastuzumab PK 标准化流程确定检测范围确定包板和检测抗体浓度和孵育条件确定稀释比（MRD)确定标准曲线和质控（A&P Run）方法验证:重现性，回收率，选择性，稳定性，稀释线性样品分析，问题解决和报告
-
小鼠体内抗体PK分析
Parameter Unit WT RAGKO Cmax μg/ml 13.6 11.3 Tmax h 0.25 0.417 AUC 0-t μg/ml*h 1300 1100 t1/2 h 344 223 MRT 0-inf_obs h 485 317 已验证过的PK方法 (ELISA, MSD, CBA):Fc, Fab, TCR, ADC, His, 细胞因子以及纳米抗体采用PK WinNonlin软件进行多药代动力学参数分析拥有数百种抗体在小鼠、大鼠和猴中的药代动力学研究经验 -
猴体内抗体PK分析
Parameter Unit WT RAGKO Cmax μg/ml 191 134 Tmax h 115 35.2 AUC 0-t μg/ml*h 46500 12600 t1/2 h 126 56.6 MRT 0-inf_obs h 233 80.2 已验证过的PK 方法 (ELISA, MSD, CBA):Fc, Fab, TCR, ADC, His, 细胞因子以及纳米抗体采用PK WinNonlin软件进行多药代动力学参数分析建立猴子PK研究和毒性前研究 -
Trastuzumab ADA 检测流程方法开发:确认检测范围、包被抗体和检测抗体浓度和孵育条件SCP(筛选阈值), CCP(确认阈值）以及 TCP(滴度阈值)方法验证:重现性, 耐药性, 选择性, 灵敏度以及稳定性质控:标曲, PC(阳性质控), NC(阴性质控）制备样品分析：ELISA 或 MSD滴度确定和问题解决
-
ADA分析的生物分析平台小鼠曲妥珠单抗ADA分析
样品 WT-1 WT-2 WT-3 RAGKO-1 RAGKO-2 RAGKO-3 WT-1 WT-2 WT-3 RAGKO-1 RAGKO-2 RAGKO-3 给药方式 Pre-dose Pre-dose Pre-dose Pre-dose Pre-dose Pre-dose IV2+SC IV2+SC IV2+SC IV2+SC IV2+SC IV2+SC 抑制率 -24.8 -22.1 -6.4 -1.3 6.0 5.3 29.8 26.6 -3.2 -4.9 0.0 -20.9 结果 - - - - - - + + - - - - 滴度 - - - - - - 1.5 1 - - - - 在RAGKO免疫缺陷小鼠中未检测到ADA -
FcRn在抗体转入组织中的关键作用以及体外分析策略
包板抗体 检测抗体 检测物 检测限 检测平台 驴抗人IgG
(from Jackson)羊抗人IgG
(from Jackson)Trastuzumab
(In house)15-32805pg/ml MSD -
MDCK-hFcRn/B2M 转胞分析
-
MDCK-hFcRn/B2M 稳定细胞系的制备
基因：Human FCGRT (UniProtKB-P55899, FCGRTN_HUMAN)，and B2M (UniProtKB – P61769, B2MG_HUMAN)MDCK细胞系：Madin-Darby犬肾细胞hFcRn/B2M基因慢病毒载体转染细胞选择高/中/低表达的单个克隆通过Transwell对多种抗体转胞作用的功能分析 -
MDCK-hFcRn/B2M 转胞分析
Sample Transcytosis ng/Ml(n=3) MDCK_IgG 0.94 MDCK-FcRn_IgG 19.40 MDCK_IgG-DXD 0.42 MDCK-FcRn_IgG-DXD 28.90 MDCK_IgG-AAA 1.14 MDCK-FcRn_IgG-AAA 3.09 MDCK_IgG-R-YTE 0.67 MDCK-FcRn_IgG-R-YTE 83.14 MDCK_FC-LALA-YTE 3.44 MDCK-FcRn_FC-LALA-YTE 182.81 MDCK_Albumin 0.38 MDCK-FcRn_Albumin 7.78 在缓冲液A中加入40ug/ml供试品，与细胞孵育18小时，然后检测缓冲液B Test articles:IgG：human IgGIgG-Dxd：deruxtecan 偶联IgGIgG-R-YTE：FcRn 结合增强hIgGIgG-AAA：FcRn 结合缺陷hIgGFC-LALA-YTE：FcRn 结合增强Fc融合蛋白白蛋白：重组人白蛋白
MDCK-hFcRn可以特异性转胞IgG、Fc融合蛋白、ADC、白蛋白YTE突变可增强转胞作用，而AAA突变可抑制转胞作用 -
受体占位分析策略
-
受体占位(RO)计算根据PE值计算RO：
根据AF-647值和RO值对二抗的信号归一化
根据归一化后的二抗信号计算最终总受体比率
根据MFI信号计算RO和从计算中扣除的二抗信号值
-
Immunology in-vitro Assay Capabilities
Immune Cells activationT cell activationImmune checkpointsProliferationCytokine secretionNK cell activation (IL-2)ProliferationMarker: IFN-γ, CD107aCytokine (single/multi-plex)Intracellular/ExtracellularSignal pathwayp-STATCell differentiation/polarizationT cell polarizationTh1, Th2Th17TregMonocyte derived DCImmature/MatureMonocyte derived MacrophageM1/M2 macrophageCell cytotoxicityT cell mediated cytotoxicityBsAbTCENK cell mediated cytotoxicityTumor cell killing after co-cultureAntibody related cytotoxicity assayADCCADCPCDCHemolysisAssay platform: FACS (up to 13 colors), FACS sorting, ELISA (single-plex), CBA,and MSD； Proliferation (CTG, CFSE labeling, Ki67), Killing (CTG, LDH, CFSE labeling), HTRF, AlphaLISA -
Platforms of Efficiency, PK, PD and Safety
